Kháng thể đơn dòng là gì? Các nghiên cứu khoa học về Kháng thể đơn dòng

Bạch cầu phản ứng với lipopolysaccharide (LPS) ở nồng độ nano gram trên mililit bằng cách tiết ra cytokine như yếu tố hoại tử khối u-α (TNF-α). Tiết ra quá mức TNF-α gây sốc nội độc tố, một biến chứng nhiễm trùng có khả năng gây tử vong lớn. LPS trong máu nhanh chóng liên kết với protein huyết thanh, protein liên kết lipopolysaccharide (LBP) và các phản ứng tế bào với mức độ LPS sinh lý phụ thuộc vào LBP. CD14, một kháng nguyên biệt hóa của bạch cầu đơn nhân, đã được phát hiện liên kết với các phức hợp LPS và LBP, và việc chặn CD14 bằng kháng thể đơn dòng đã ngăn cản việc tổng hợp TNF-α bởi máu toàn thể được ủ với LPS. Do đó, LPS có thể kích thích các phản ứng bằng cách tương tác với một protein liên kết hòa tan trong huyết thanh, sau đó liên kết với protein bề mặt tế bào CD14.

Bài báo mô tả việc sản xuất kháng thể đơn dòng chuột, Ki‐67. Kháng thể Ki‐67 nhận diện một kháng nguyên hạt nhân có mặt ở các tế bào đang phân chia, nhưng không có ở các tế bào trạng thái nghỉ. Việc nhuộm miễn dịch với Ki‐67 cho thấy có phản ứng hạt nhân ở các tế bào của trung tâm sinh sản của các nang vỏ, thyocyte vỏ, tế bào cổ họng của niêm mạc tiêu hóa, tế bào tinh nguyên không phân hóa và tế bào của một số dòng tế bào người. Kháng thể Ki‐67 không phản ứng với các tế bào được biết đến là ở trạng thái nghỉ, chẳng hạn như lymphocyte, monocyte, tế bào chính và tế bào Paneth của niêm mạc tiêu hóa, hepatocyte, tế bào thận, tế bào tinh trùng trưởng thành, tế bào não, v.v. Biểu hiện của kháng nguyên được Ki‐67 nhận diện có thể được kích thích ở lymphocyte trong máu ngoại vi sau khi tiếp xúc với phytohaemagglutinin, trong khi đó nó biến mất từ các tế bào HL‐60 được kích thích bằng ester phorbol để phân hóa thành đại thực bào trưởng thành ở trạng thái nghỉ. Những phát hiện này gợi ý rằng Ki‐67 hướng đến một kháng nguyên hạt nhân liên quan đến sự gia tăng tế bào. Một loạt nhuộm miễn dịch đầu tiên từ các mẫu sinh thiết khối u cho thấy Ki‐67 có thể là một công cụ mạnh mẽ để đánh giá một cách dễ dàng và nhanh chóng tỷ lệ các tế bào đang phân chia trong một khối u.

IDEC-C2B8 là một loại kháng thể đơn dòng (MoAb) lai tạo chống lại kháng nguyên CD20 đặc hiệu tế bào B, biểu hiện trên u lympho không Hodgkin (NHL). MoAb này có khả năng trung gian hóa độc tế bào phụ thuộc bổ thể và kháng thể, đồng thời có hiệu ứng ức chế trực tiếp sự phát triển của các dòng tế bào B ác tính trong ống nghiệm. Các thử nghiệm pha I với liều đơn tới 500 mg/m2 và 4 liều hàng tuần 375 mg/m2 cho thấy có đáp ứng lâm sàng mà không có độc tính giới hạn liều. Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu giai đoạn II, đa trung tâm, đánh giá bốn đợt truyền hàng tuần liều 375 mg/m2 IDEC-C2B8 ở bệnh nhân NHL có độ ác tính thấp hoặc dạng tiêu điểm đã tái phát (nhóm A-D theo Định dạng Công trình). Bệnh nhân được theo dõi về các biến cố bất lợi, dược động học kháng thể và đáp ứng lâm sàng. Ba mươi bảy bệnh nhân với độ tuổi trung bình 58 tuổi (dao động từ 29 đến 81 tuổi) đã được điều trị. Tất cả bệnh nhân đã tái phát sau hóa trị liệu (trung bình 2 phác đồ trước đó) và 54% đã thất bại với hóa trị liệu mạnh. Các tác dụng phụ khi truyền (mức độ 1-2) bao gồm sốt nhẹ, ớn lạnh, triệu chứng hô hấp và đôi khi tụt huyết áp chủ yếu quan sát thấy ở đợt truyền kháng thể ban đầu và hiếm khi xảy ra với các liều sau. Sự suy giảm tế bào B máu ngoại vi xảy ra nhanh chóng, với sự phục hồi bắt đầu từ tháng thứ 6 sau điều trị. Không có thay đổi đáng kể về mức IgG trung bình và tỷ lệ nhiễm trùng không tăng so với mong đợi ở dân số này. Có sự thuyên giảm lâm sàng ở 17 bệnh nhân (3 thuyên giảm hoàn toàn và 14 thuyên giảm một phần), đạt tỷ lệ đáp ứng theo ý định điều trị là 46%. Sự xuất hiện của các đáp ứng khối u xuất hiện ngay từ 1 tháng sau điều trị và đạt tối đa sau 4 tháng điều trị. Trong 17 bệnh nhân đáp ứng, thời gian trung bình cho đến khi tiến triển là 10,2 tháng (5 bệnh nhân vượt quá 20 tháng). Khả năng đáp ứng khối u có liên quan với dạng tế bào nhất, với khả năng duy trì mức cao kháng thể huyết thanh sau liều đầu tiên, và với thời gian dài thuyên giảm sau hóa trị liệu trước đó. Một bệnh nhân phát triển đáp ứng miễn dịch có thể phát hiện nhưng không thể định lượng đối với kháng thể, không có ý nghĩa lâm sàng. IDEC-C2B8 với liều 375 mg/m2 hàng tuần trong 4 tuần có hoạt tính chống u ở bệnh nhân NHL đã tái phát độ ác tính thấp hoặc dạng tiêu điểm. Kết quả với điều trị ngắn gọn và ngoại trú so sánh khả quan với kết quả hóa trị chuẩn, và IDEC-C2B8 có hồ sơ an toàn tốt hơn. Các nghiên cứu tiếp theo đánh giá IDEC-C2B8 trong các loại u lympho khác, dù đơn lẻ hay kết hợp với hóa trị liệu, là đáng khuyến khích.

Viêm khớp dạng thấp (RA), một bệnh lý hệ thống, được đặc trưng bởi phản ứng viêm mạn tính ở màng hoạt dịch của các khớp và liên quan đến sự thoái hóa của sụn và sự xói mòn của xương gần khớp. Nhiều cytokine tiền viêm bao gồm TNFα, chemokine và yếu tố tăng trưởng được biểu hiện ở các khớp bị bệnh. Cơ sở lý luận rằng TNFα đóng vai trò trung tâm trong việc điều chỉnh các phân tử này và tiềm năng bệnh lý của chúng ban đầu được cung cấp qua việc chứng minh rằng kháng thể chống TNFα được giao cho các nền nuôi tế bào in vitro của dân số đại diện các tế bào từ các khớp bị bệnh đã ức chế sự sản xuất tự phát IL-1 và các cytokine tiền viêm khác. Việc tiêm hệ thống kháng thể chống TNFα hoặc protein dung hợp sTNFR tới các mẫu chuột RA đã được chứng minh là có tác dụng chống viêm và bảo vệ khớp. Những cuộc điều tra lâm sàng trong đó hoạt động của TNFα ở bệnh nhân RA đã được ngăn chặn bằng cách tiêm tĩnh mạch infliximab, một kháng thể đơn dòng kháng TNFα (mAB), đã cung cấp bằng chứng rằng TNF điều chỉnh sản xuất IL-6, IL-8, MCP-1, VEGF, sự tuyển dụng tế bào miễn dịch và viêm vào các khớp, sự tạo mạch, và giảm mức độ trong máu của matrix metalloproteinase-1 và -3. Các thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên, kiểm soát bằng giả dược, đa trung tâm của các chất ức chế TNFα ở người đã chứng minh sự hiệu quả ổn định và nổi bật trong việc kiểm soát các dấu hiệu và triệu chứng, với hồ sơ an toàn thuận lợi, ở khoảng hai phần ba số bệnh nhân trong tối đa 2 năm, và khả năng của chúng làm chậm tổn thương khớp. Infliximab (mAB) và etanercept (một protein dung hợp sTNF-R-Fc) đã được các cơ quan quản lý tại Hoa Kỳ và Châu Âu phê chuẩn để điều trị RA, và chúng đại diện cho sự bổ sung mới đáng kể vào các lựa chọn liệu pháp khả dụng.

Mẫu nhuộm hóa mô miễn dịch của 37 kháng thể đơn dòng neuron’s cụ thể đã được mô tả trước đây chia thành bốn nhóm: (i) nhóm kháng thể kháng synap, (ii) nhóm kháng thể kháng sợi tế bào thần kinh, (iii) nhóm kháng thể kháng perikaryon-sợi thần kinh, và (iv) một kháng thể đơn lẻ với một epitope phân phối rộng phủ kín mẫu của nhóm ii và iii. Những kháng thể của các nhóm ii, iii, và iv được chứng minh là đặc hiệu đối với các tiểu đơn vị của neurofilament, mặc dù có ít sự chồng lấn trong các mẫu nhuộm giữa nhóm ii và iii. Chúng tôi đã khảo sát 9 kháng thể này về khả năng phân biệt trạng thái chức năng của neurofilaments phụ thuộc vào quá trình phosphoryl hóa. Sau khi tiêu hóa bằng phosphatase, nhuộm điện di lớp ngoài của các thành phần neurofilaments bị xóa bởi 5 kháng thể từ nhóm ii, tăng lên với ba kháng thể từ nhóm iii, và không bị ảnh hưởng với kháng thể iv. Nhuộm hóa mô miễn dịch của các mẫu paraffin cố định Bouin của não chuột không bị ảnh hưởng bởi việc tiền điều trị với phosphatase. Với kháng thể của nhóm ii, việc tiêu hóa bằng trypsin cũng không làm thay đổi nhuộm, nhưng khi tiếp sau là tiêu hóa bằng phosphatase, nhuộm bị giảm với ba trong số năm kháng thể. Ngược lại, việc tiêu hóa bằng trypsin đã loại trừ tất cả nhuộm với mỗi kháng thể từ nhóm iii. Nếu tiếp sau bằng tiêu hóa với phosphatase, nhuộm tái xuất hiện, nhưng mẫu nhóm iii được thay thế bằng mẫu nhóm ii. Nhuộm của mẫu này lại bị xóa bởi việc điều trị với trypsin lần hai. Kháng thể từ nhóm iv mất hầu hết mẫu nhuộm của nhóm ii và iii khi các mẫu được tiêu hóa bằng trypsin. Mẫu nhóm ii tái xuất hiện và thực tế được tăng cường bởi một quá trình điều trị với phosphatase sau đó và lại giảm đi bởi lần điều trị với trypsin lần hai. Nhuộm bởi bốn trong năm kháng thể từ nhóm ii bị ức chế bởi phosphate vô cơ. Dữ liệu chỉ ra rằng một số tế bào thần kinh, các nhánh tương ứng của chúng, và ít nhất các sợi trục gần có neurofilaments không phosphoryl hóa và các sợi dài, bao gồm cả sợi trục tận, có neurofilaments phosphoryl hóa. Chúng tôi đề xuất rằng phosphoryl hóa có thể là một yếu tố trong việc ổn định các cấu trúc neurofilament dày đặc và tính đa dạng của các cấu trúc này có thể đóng một vai trò trong khả năng đa chức năng của từng tế bào thần kinh.

Ba mươi dòng hybridomas secreting immunoglobulin chống lại các kháng nguyên u bướu virus simian 40 đã được phân lập và nhân bản. Trong số đó, 28 dòng sản xuất kháng thể liên kết với antigen large-T của virus simian 40, và 2 dòng sản xuất kháng thể liên kết với protein 53,000 dalton của vật chủ. Như trong các công trình trước đây, antigen large-T được phát hiện có ít nhất một định nghĩa chung với antigen small-t và có tối thiểu sáu định nghĩa độc nhất. Một số kháng thể đơn dòng từ các dòng hybridoma loại L đã nhận diện các định nghĩa có mặt trên một tập hợp con của antigen large-T từ các tế bào chuột được chuyển hóa bởi virus simian 40. Các kháng thể đơn dòng này sẽ hữu ích trong các nghiên cứu về cấu trúc và chức năng của các kháng nguyên u bướu virus simian 40.

Hai protein phong phú với 140 và 134 axit amin đã được tinh khiết và xác định trình tự từ não người. Chúng được xác định thông qua khả năng tương tác của chúng trên các tấm miễn dịch với một kháng thể đơn dòng đã được đặc trưng một phần, kháng thể này nhận diện protein tau theo cơ chế phụ thuộc vào sự phosphoryl hóa. Protein 140 axit amin giống hệt với tiền chất của thành phần không phải Aβ của amyloid bệnh Alzheimer, mà lại có tính đồng hợp cao với synuclein từ các điện bản của cá Torpedo và não chuột. Protein 134 axit amin là đồng homologue với phosphoneuroprotein 14 của bò; nó có 61% đồng nhất về trình tự với protein 140 axit amin. Tính tương đồng chưa từng được nhận diện giữa hai protein này xác định một họ các synuclein trong não người. Chúng tôi gọi protein 140 và 134 axit amin là α‐synuclein và β‐synuclein, tương ứng. Cả hai synuclein đều được biểu hiện chủ yếu trong não, nơi chúng tập trung tại các đầu dây thần kinh trước synapse.